一、试剂盒说明 

  WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成橙黄色水溶性的甲月赞。WST-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲月赞能够溶解在组织培养基中，生成的甲月赞量与活细胞数量成正比。

CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性试验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。实验的灵敏度比其它四唑盐如MTT, XTT, MTS或WST -1高。由于CCK-8溶液相当稳定，并且对细胞没有毒性，可直接加入到细胞样品中长时间孵育。

二、试剂盒组份

三、试剂盒以外自备仪器和试剂

低速离心机 、酶标仪（450nm波长）、平板摇床、微量移液器、96孔板

四、 注意事项

1. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。

2. 如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有CCK-8的待测溶液在450 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100 μl培养基和10 μl CCK-8进行检测。

3. 用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡，否则会干扰测定。

4. 为保证您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

五、 操作方法

1. 96孔板加入细胞100μL/孔（约1×10⁴），置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时。

2.加入适当浓度的受试化合物。

3.将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液。

5. 37℃下孵育1～4小时。

6. 酶标仪在450nm波长处检测每孔的光密度。

7.结果分析 

(1) 细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值（完全培养基加CCK-8，无细胞）或空白药物孔OD值（完全培养基加受试药物的不同稀释度加CCK-8，无细胞），各重复孔的OD值取均数±SD。

细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。

细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

        (2) 求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC₅₀)及T/C = 10%时的药物浓度(IC₉₀)。

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