中国北京植物脱落酸(ABA)ELISA试剂盒说明书-文献综述-资讯-生物在线

中国北京植物脱落酸(ABA)ELISA试剂盒说明书

作者:北京雅安达生物技术有限公司 2014-10-23T00:00 (访问量:2888)

检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被植物激素脱落酸(ABA)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物激素脱落酸(ABA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
操作注意事项
1.  试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3.  预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。
4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.  所有液体组分使用前充分摇匀。
操作步骤
1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.  设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.  待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;
4.  随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体50μL,,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.  所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.  所有孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
免责声明
1.   试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或植物体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
2.   严格按照说明书操作,不同批号不可交换使用,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
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